Treg 細胞：Treg 細胞（也稱作調(diào)節(jié)性T細胞或者是T調(diào)控細胞）是具有顯著免疫抑制性功能的細胞。它能夠抑制其他細胞的免疫應答，在維持機體免疫平衡和預防自身免疫疾病、移植排斥方面發(fā)揮著重要作用。Treg 細胞特異性地表達 CD4+ CD25+ Foxp3+， CD127 不表達或者弱表達。IL-2 和 TGF-β 是誘導 Treg 主要的細胞因子。 

小鼠脾臟CD4+ T細胞Treg極化實驗

1.根據(jù)實驗方法從小鼠脾臟中分離 naive  CD4+  CD25?  T 細胞。

2. anti-mouse  CD3ε 包被實驗：在細胞培養(yǎng)板上，加入 anti-mouse  CD3ε,  clone  145-2C11  (10 μg/ml),。37℃ 孵育2小時或者4℃過夜。然后將液體輕輕地倒出，用無菌 PBS 進行清洗3次，棄上清。

3.將分離出的 naive  CD4+  CD25?  T 細胞以 5 x105/ml 的濃度種于包被好的培養(yǎng)板中同時加入 anti-mouse  CD28, clone  37.51  (10 μg/ml)， TGF-β1  (5 ng/mL), IL-2 (10 ng/ml)進行培養(yǎng)。

4.細胞培養(yǎng)3天后，收集細胞進行清洗。然后進行細胞染色實驗。

實驗相關材料

RBC  Lysis  Buffer  (cat.  # 420301)； Anti-mouse  CD3e (LEAF?  format,  cat. # 100314)， Anti-mouse  CD28  (LEAF?  format,  cat. # 102112)， Recombinant  Mouse  IL-2  (carrier-free)  (cat #575402)， Recombinant  human  TGF-β1  (carrier-free)  (cat.  # 580702)，  Brefeldin  A  (cat.  # 420601)， PdBu  (Phorbol  12,13-dibutyrate)  (cat.  # P1269  from  Sigma)

參考文獻：

1.Rahul Roychoudhuri，et al. 2013.Nature 498:506-510.  

2. Nicholas Arpaia，et al. 2013.Nature 504:451-455.

3. Steven Z. Josefowicz,et al.2012.Nature 482:395-399.

4.Emily B Heikamp,et al.2014 Nature Immunology 15:457-464.