基因表達(dá) (gene expression) 是指細(xì)胞在生命過程中，把儲存在DNA中的遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯，轉(zhuǎn)變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子（或RNA分子）。很多疾病的發(fā)生發(fā)展、很多藥物的作用機(jī)理、很多生物的代謝調(diào)控作用等都和基因表達(dá)的變化有關(guān)，因此對基因表達(dá)進(jìn)行分析十分重要。由于基因表達(dá)是在單個細(xì)胞水平進(jìn)行調(diào)控，所以需要用多種方法來分析單個細(xì)胞如干細(xì)胞、神經(jīng)元、發(fā)育組織、激光捕獲切片的基因表達(dá)方式。

為了便于研究單細(xì)胞的基因表達(dá)，美國Signosis公司開發(fā)出一種基于SYBR Green的單細(xì)胞實(shí)時熒光定量RT-PCR檢測試劑，該試劑可以使用細(xì)胞裂解液直接檢測基因表達(dá)水平，無需RNA制備過程。

* SYBR Green是廣泛用于雙鏈DNA的特異性染料，常用作實(shí)時熒光定量PCR報告染料。

小編說了半天，下面正式Pick出今日介紹的主角：

與其他定量試劑盒相比，Signosis的試劑盒原理是什么？不同之處？優(yōu)點(diǎn)是？

1）試劑盒包括cDNA合成和PCR擴(kuò)增的所有試劑：

2）您只需要準(zhǔn)備：目的基因特異性引物

3）不同之處在于：無需額外制備/提取細(xì)胞RNA

4）原理圖：

圖1 試劑盒原理：細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞后直接進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄及隨后的 PCR分析。 

5）結(jié)果展示：

圖2  A: 比較Signosis與其他品牌的細(xì)胞裂解液。分別對裂解產(chǎn)物中的β-actin進(jìn)行30個循環(huán)反轉(zhuǎn)錄PCR。 

B: 基因組DNA污染檢測。Lane1：細(xì)胞裂解產(chǎn)物不經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄直接對β-actin進(jìn)行36個循環(huán)PCR擴(kuò)增；Lane2：細(xì)胞裂解液反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA后對β-actin進(jìn)行36個循環(huán)PCR擴(kuò)增。 

圖3 細(xì)胞裂解產(chǎn)物中檢測靶基因。

隨著HeLa細(xì)胞數(shù)的增加，分別用適量細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，而后在7700 PCR儀上進(jìn)行Actin、GAPDH和B2M基因的3復(fù)孔qPCR反應(yīng)。 

6）產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：

7）FAQs：

a. 細(xì)胞裂解液能使用幾次？

每個試劑盒里包含1mL的細(xì)胞裂解液：

b. 有沒有儀器要求？

兼容SYBR Green的PCR儀。

更多信息請點(diǎn)擊Signosis官網(wǎng)

www.signosisinc.com