OptiPrep?是Serumwerk Bernburg AG的一款多功能分離液，Serumwerk Bernburg成立于1954年，是一家現(xiàn)代化的、專(zhuān)門(mén)的生產(chǎn)商和服務(wù)商。OptiPrep生產(chǎn)、包裝、發(fā)布嚴(yán)格按照GMP和ISO13485標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

OptiPrep

OptiPrep?是Serumwerk Bernburg AG的一款多功能分離液，其主要成分是60%碘克沙醇。密度為1.32 g/ml，可以用來(lái)分離多種種屬、以及多種細(xì)胞、病毒、蛋白質(zhì)、核酸等不同顆粒。OptiPrep不含多糖，對(duì)靶細(xì)胞無(wú)毒副作用，且內(nèi)毒素含量＜0.13EU/ml,遠(yuǎn)低于歐洲標(biāo)準(zhǔn)（1EU/ml）。

配制不同密度的OptiPrep：

使用密度溶液的配制方法，是基于使用0.85% (w/v) NaCl, 10 mM Tricine-NaOH, pH 7.4作為細(xì)胞懸浮培養(yǎng)基。為了使溶液在任何梯度下都保持濃度恒定，首先將4體積的OptiPrep?與2體積的溶液A (3倍濃度的緩沖液) 混合，來(lái)制備40% (w/v)的碘克沙醇工作溶液(WS)。然后，使用溶液B進(jìn)一步稀釋碘克沙醇工作溶液，以獲得適當(dāng)密度的梯度溶液，常見(jiàn)的密度配制見(jiàn)表1。

 

注：HEPES/Tricine可以被其它有機(jī)緩沖液替代。如果溶液B中需要添加低濃度(1-2mM)的其它物質(zhì)，如Mg2+或Ca2+，可以在溶液A也添加3-6 mM，以保持其在梯度中不變，如果不需要維持溶液恒定或二價(jià)陽(yáng)離子濃度恒定，OptiPrep?可以直接用溶液B稀釋(含有或不含低濃度的二價(jià)陽(yáng)離子)，所獲得的梯度溶液的密度和折射率與表1相比可能會(huì)有微小的差異，所有梯度溶液的滲透壓都在285-305 mOsm范圍內(nèi)。

PS:使用等滲鹽溶液和培養(yǎng)基配制、使用含血清的培養(yǎng)基配制方法請(qǐng)參考往期文章：

OptiPrep?的應(yīng)用——不同密度梯度溶液的配制（關(guān)注下方“拉斯維加斯.0567CC”公眾號(hào)）

OptiPrep滲透壓(約為290 mOsm/kgH2O)與血漿滲透壓(約為300mOsm/kgH2O)相近,較少考慮平衡滲透壓，在使用相同稀釋溶液的情況下，分離液密度與碘克沙醇的百分比成正比。
 

 

Percoll

Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮——polyvinylpyrrolidone (PVP)的硅膠顆粒的水溶液。滲透壓很低(<20mosm／kg H２O), 粘度也很小，密度為1.3g／ml左右。所以配置前要調(diào)整滲透壓。

配制不同密度的Percoll:

Percoll具有非常低的滲透壓(< 25mOsm /kg H2O)，配制不同Percoll時(shí)需要注意調(diào)整滲透壓。將9份Percoll (v/v)加入1份1.5 M NaCl (v/v)或10倍濃度的細(xì)胞培養(yǎng)基中，制備等滲Percoll儲(chǔ)存液（SIP，Percoll Stock Isotonic Percoll）。對(duì)于對(duì)離子敏感的亞細(xì)胞粒子，可以通過(guò)將9份Percoll (v/v)加入1份2.5 M蔗糖(v/v)來(lái)制備蓄積等滲Percoll (SIP)。

不同等滲溶劑配置的 Percoll 儲(chǔ)存液具有不同密度

稀釋儲(chǔ)存液SIP以降低密度只需添加0.15 M NaCl（分離亞細(xì)胞顆?；虿《緯r(shí)加入0.25 M蔗糖溶液），可將等滲Percoll（SIP）的溶液稀釋至較低的密度進(jìn)行分離細(xì)胞。以下公式可用于計(jì)算獲得所需密度的溶液所需各組分的體積。
 

其中Vy =稀釋用等滲溶劑的體積（mL）

Vi = SIP的體積（mL）

ρi = SIP的密度（g / mL）

ρy =稀釋用等滲溶劑的密度（g / mL）

（0.15 M NaCl的濃度為1.0046 g / mL，0.25 M蔗糖的密度為1.032 g / mL）

ρ=最終溶液的密度（g / mL）

例如

要將55 mL的SIP稀釋至1.07 g / mL的最終密度，計(jì)算所需的0.15 M NaCl量。

所需0.15 M NaCl的體積= 55×（1.123-1.07）/(1.07-1.0046)= 44.6ml

用等滲鹽水或蔗糖溶液稀釋Percoll儲(chǔ)存液 (SIP)。ρ0是Percoll原液的密度

注意：百分比是Percoll儲(chǔ)存液的體積占比

以0.15M NaCl作為等滲溶液稀釋Percoll密度與百分比的對(duì)應(yīng)表。（來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)僅供參考）

上面的公式可用于獲得非常接近所需實(shí)際密度的密度。但是，輕微的稀釋介質(zhì)的體積 和密度的變化會(huì)影響最終密度。

OptiPrep VS Percoll配比參照表

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