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【流式學(xué)習(xí)】一起聊聊PNH和FLAER的故事

作者：admin信息來源：達(dá)科為日期：2019年08月01日打印字體：大 中 小
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陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH）它是由1個或幾個造血干細(xì)胞上PIG-A基因突變造成的非惡性的克隆性疾病，PIG-A突變造成糖基磷脂酰肌醇（glycosyl phosphatidyl inositol，GPI）合成異常，進(jìn)而導(dǎo)致由GPI錨連在細(xì)胞膜上的一組膜蛋白丟失。臨床主要表現(xiàn)為溶血性貧血、骨髓衰竭、平滑肌張力障礙和血栓的形成。

國際PNH興趣小組將PNH分為以下三類

  • 經(jīng)典型PNH:該患者有典型的溶血和血栓形成；

  • 合并其他骨髓衰竭性疾病:如再生性貧血（AA）或骨髓增生異常綜合征 (MDS)；

  • 亞臨床型PNH：患者有輕微的PNH克隆，但沒有溶血和血栓臨床證據(jù)。

目前對PNH的診斷和檢測主要是通過流式細(xì)胞術(shù)分析CD55和CD59在紅細(xì)胞和粒細(xì)胞上的缺失情況來判斷，但CD55、CD59等補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)還會受到其它因素的影響, 如MDS、細(xì)胞發(fā)育不全等均有可能導(dǎo)致膜蛋白的缺失,因此僅檢測CD55和CD59有一定的局限性，且容易出現(xiàn)誤診。

隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)FLAER可以有效的提高檢測準(zhǔn)確率。FLAER是Alexa-488標(biāo)記無活性的嗜水氣單胞菌溶素前體的變異體，可以特異性地與GPI錨連蛋白結(jié)合，與普通氣單胞菌溶素相比，不會引起細(xì)胞溶血，并能有效的把PNH細(xì)胞（GPI-）和正常細(xì)胞（GPI+）區(qū)分開來。但由于紅細(xì)胞表面某些糖蛋白的存在使FLAER不能很好的與錨蛋白結(jié)合, FLAER分析法一般只用于粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的檢測。

 圖：取新鮮PNH病人外周血裂紅后用FLAER染色，分析單核細(xì)胞、粒細(xì)胞中的PNH克隆數(shù) [1]。
有文獻(xiàn)報道了[2]536例疑似PNH患者FLAER分析法與傳統(tǒng)流式分析法對比結(jié)果，發(fā)現(xiàn)FLAER分析法63例患者檢測到PNH克隆，檢出率11.8%并且克隆數(shù)都較大。而傳統(tǒng)分析法只有33例患者檢測出PNH克隆，檢出率6.2%并且檢測的克隆較小。FLAER檢測微小的PNH克隆更加敏感，且不受輸血溶血的影響。常規(guī)僅可以檢測出1%的PNH細(xì)胞，而FLAER可以檢測出遠(yuǎn)小于<1%PNH細(xì)胞[3]。

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50 ug

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50 ug

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參考文獻(xiàn)

  • Keeney M, Illingworth A,Sutherland DR ,etc. Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria Assessment by FlowCytometric Analysis Clin Lab Med. 2017 Dec;37(4):855-867. 

  • Sutherland DR, Kuek N, Azcona-Olivera J,etc. Use of a FLAER-based WBC assay in the primary screening of PNH clones. Am J Clin Pathol. 2009 Oct;132(4):564-72. 

  • Illingworth AJ, Marinov I, Sutherland DR.Senstive andaccurate identification of PNH clones based on ICCS/ESCCA PNH ConsensusGuidelines-A summary. nt J Lab Hematol. 2019May;41 

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