InvivoGen提供多種RIG-I和STING相關(guān)產(chǎn)品

RIG-I信號通路

RIG-I配體

? 5’ppp-dsRNA

5’ppp-dsRNA是一種5’三磷酸雙鏈RNA，通過一個由19個核酸分子通過磷酸二酯鍵聚合成的5’三磷酸單鏈RNA和其非三磷酸互補(bǔ)鏈雜交形成。5’ppp-dsRNA的序列可以通過篩選各種序列突變體確定。未加帽的5’三磷酸雙鏈RNA能夠被RIG-I特異性識別。

? 3p-hpRNA

3p-hpRNA是通過體外轉(zhuǎn)錄甲型流感病毒（H1N1）序列而產(chǎn)生的5’三磷酸發(fā)夾RNA。這個有87個核酸分子的RNA寡核苷酸含有未加帽的5`三磷酸酯末端和雙鏈片段，它們是RIG-I識別的特征結(jié)構(gòu)。3p-hpRNA是RIG-I的一種有效并特異性的激動劑。

RIG-I/MAVS 報告基因細(xì)胞

InvivoGen提供一系基于人源肺癌細(xì)胞株A549，小鼠巨噬細(xì)胞RAW和人源胚腎細(xì)胞HEK293穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，助力RNA感受器RIG-I信號通路的研究。這些細(xì)胞系包括RIG-I或MAVS基因的敲除細(xì)胞株（衍生自A549或RAW細(xì)胞系）或者RIG-I基因的過表達(dá)細(xì)胞株（衍生自HEK-293細(xì)胞系）。

? A549-Dual?

? A549-Dual? KO-RIG-I 

? A549-Dual? KO-MAVS

? HEK-Lucia? Null

? HEK-Lucia? RIG-I

? RAW-Lucia? ISG

? RAW-Lucia? ISG KO-RIG-I

? RAW-Lucia? ISG KO-MAVS

描述

所有的RIG-I/MAVS報告基因細(xì)胞系均表達(dá)一個含有分泌型熒光素酶基因ISG（干擾素刺激基因）誘導(dǎo)型構(gòu)件?；罨疪IG-I/MAVS信號通路可誘導(dǎo)ISG啟動子的活化并產(chǎn)生熒光素酶，該酶存在于細(xì)胞上清并能夠通過熒光素酶檢測試劑QUANTI-Luc?檢測定量。源于A549的細(xì)胞攜帶一個額外的NF-κB誘導(dǎo)表達(dá)分泌型堿性磷酸酶（SEAP）基因構(gòu)件，該酶的活性能夠通過SEAP檢測試劑QUANTI-Blue?檢測定量。

這些RIG-I/MAVS報告基因細(xì)胞株攜帶Zeocin?單抗性基因或Zeocin?和Blasticidin（參見最后一頁）雙抗性基因。

結(jié)果

使用RIG-I激動劑，復(fù)合了LyoVec?的5’ppp-dsRNA和3p-hpRNA刺激A549-Dual?和RAW-Lucia? ISG細(xì)胞系，ISG應(yīng)答顯著。在A549-Dual?細(xì)胞中3p-hpRNA激動性強(qiáng)度明顯高于5’ppp-dsRNA，30 ng/ml的3p-hpRNA復(fù)合物活化信號已明顯高于300 ng/ml 5’ppp-dsRNA的復(fù)合物。相反，在RIG-I-KO或MAVS-KO細(xì)胞株中應(yīng)答消失。使用RIG-I配體刺激HEK-Lucia?對照細(xì)胞時ISG反應(yīng)很弱。而在HEK-Lucia? RIG-I細(xì)胞中，由于RIG-I基因的組成型過表達(dá)導(dǎo)致這種應(yīng)答尤為強(qiáng)烈。同樣，當(dāng)使用3p-hpRNA和5’ppp-dsRNA時觀察到更高水平的ISG應(yīng)答。在衍生自A549的細(xì)胞株中NF-κB對于RIG-I配體的反應(yīng)跟ISG應(yīng)答是相似的，雖然前者更弱一些（參考網(wǎng)站數(shù)據(jù)）。

ISG對RIG-I配體的反應(yīng)：使用300 ng/ml的5’ppp-dsRNA或30 ng/ml的3p-hpRNA刺激衍生自A549的細(xì)胞；使用1 μg/ml 5’ppp-dsRNA或3p-hpRNA刺激衍生自RAW和HEK293的細(xì)胞。經(jīng)過孵育過夜，可使用QUANTI-Luc?檢測上清中Lucia熒光素酶活性的相對光單位（RLUs）以測試ISG的反應(yīng)。

相關(guān)產(chǎn)品

l STING突變株

STING SAVI報告基因細(xì)胞株

InvivoGen提供給一系列基于人源THP1單核細(xì)胞系的STING突變體的報告基因細(xì)胞株。其中，有兩款表達(dá)STING- associated vasculopathy with onset in infancy（SAVI）的功能獲得性突變體(S154 and M155)。SAVI患者在STING蛋白中顯示出單一突變，導(dǎo)致其持續(xù)激活和ISG的過度活化。S154是新生突變[1]，M155是遺傳突變[2]。STING SAVI報告基因細(xì)胞株是篩選STING通路抑制劑便捷有力的工具。

? THP1-Dual? KI-hSTING-S154     ? THP1-Dual? KI-hSTING-M155

描述

THP1-Dual? KI-hSTING-S154細(xì)胞和THP1-Dual? KI-hSTING-M155細(xì)胞均來自THP1-Dual? KO-STING細(xì)胞，該細(xì)胞衍生自THP-1細(xì)胞，穩(wěn)定敲除了內(nèi)源性人源STING的雙等位基因并穩(wěn)定整合了兩種可誘導(dǎo)分泌的報道基因（Lucia螢光素酶和SEAP（分泌型胚胎堿性磷酸酶）。THP1-Dual? KO-STING細(xì)胞敲入了“野生型”R232人源STING突變體[3]的無內(nèi)含子編碼序列和一個S154 或M155突變位點(diǎn)。IRF3和NF-κB通路能夠通過分別測試Lucia熒光素酶或SEAP活性進(jìn)行檢測。細(xì)胞培養(yǎng)上清中的報告基因蛋白活性能夠使用QUANTI-Luc? and QUANTI-Blue?檢測試劑進(jìn)行檢測。SAVI報告基因細(xì)胞對Blasticidin和Zeocin?有抗性。

結(jié)果

功能獲得(Gain-of-function)的活化-THP1-Dual? KI-hSTING-S154細(xì)胞和THP1-Dual? KI-hSTING-M155細(xì)胞均均可以持續(xù)活化ISG，而THP-1-Dual? KI-hSTING-R232卻不能。加入IFN-β或STING激動劑將進(jìn)一步促進(jìn)ISG的活化。注意，結(jié)果已被非刺激細(xì)胞背景信號標(biāo)準(zhǔn)化。因?yàn)槠涑掷m(xù)活化STING的特性，SAVI細(xì)胞的背景非常高，誘導(dǎo)ISG應(yīng)答的增加倍數(shù)低于R232對照細(xì)胞。
       抑制劑功能-加入TBK-1抑制劑BX795，或Brefeldin A，一種抑制蛋白從ER轉(zhuǎn)運(yùn)到高爾基體的蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑，能夠顯著抑制SAVI細(xì)胞中STING信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)。所以，這些細(xì)胞能夠用于篩選STING的抑制劑。

1. Munoz J. et al., 2015. Stimulator of interferon genes-associated vasculopathy with onset in infancy: a mimic of childhood granulomatosis with polyangiitis. JAMA Dermatology 151: 872-7.

2. Jeremiah N. et al., 2014. Inherited STING-activating mutation underlies a familial inflammatory syndrome with lupus-like manifestations. The Journal of Clinical Investigation 124: 5516-20.

3. Yi G. et al., 2013. Single nucleotide polymorphisms of human STING can affect innate immune response to cyclic dinucleotides. PLOS ONE 8: e77846。

對IFN-β或STING激動劑的ISG應(yīng)答：使用104 U/ml IFN-β, 10 μg/ml 2’3’ cGAMP或2’3’ cGAMP(PS)2(Rp/Sp), 30 μM BX795 or 10 μg/ml Brefeldin A刺激衍生自THP1-Dual?細(xì)胞。孵育過夜后，通過使用QUANTI-Luc?檢測上清中Lucia熒光素酶活性測試ISG應(yīng)答。Bar值表示非刺激細(xì)胞中背景信號標(biāo)準(zhǔn)化的活性百分比。

相關(guān)產(chǎn)品

STING 篩選服務(wù)

InvivoGen提供一系列STING篩選服務(wù)的選擇，用于鑒定激活或抑制一些STING突變體的分子。欲知更多信息請聯(lián)系我們。

重組人源STING蛋白

STING通過胞漿區(qū)域與CDNs結(jié)合。InvivoGen提供的重組STING蛋白對應(yīng)可溶性的胞漿結(jié)構(gòu)域（aa 137-379）R232突變型，是普遍的人源STING蛋白的同型。這個27kDa的重組蛋白產(chǎn)生自哺乳動物中國倉鼠卵巢細(xì)胞系（CHO），通過親和層析純化，不帶標(biāo)簽，能夠被市面上的商品化人源STING抗體所識別。

l 基因篩選抗生素

細(xì)胞培養(yǎng)測試的抗生素

? 無菌

? 無內(nèi)毒素

? 驗(yàn)證篩選功能

InvivoGen提供一系列細(xì)胞培養(yǎng)測試的抗生素以確保無假陰性篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)哺乳動物細(xì)胞株。這些抗生素?zé)o菌且無內(nèi)毒素污染以避免細(xì)菌內(nèi)毒素，也被稱為LPS，對轉(zhuǎn)染細(xì)胞造成的有害影響。InvivoGen嚴(yán)格驗(yàn)證產(chǎn)品的物理化學(xué)，通過微生物和細(xì)胞培養(yǎng)以確保其功能活性。所有出品的抗生素被證實(shí)對哺乳動物細(xì)胞表現(xiàn)出長期的穩(wěn)定性并且沒有細(xì)胞毒性。

InvivoGen的篩選抗生素可與其他篩選抗生素或與細(xì)胞培養(yǎng)過程中預(yù)防支原體，細(xì)菌，真菌污染的抗微生物抗生素聯(lián)合使用。有不同的規(guī)格可供選擇。

相關(guān)產(chǎn)品

InvivoGen 1977年成立于法國，是法國較早的生物科技公司。公司成立的初期階段主要提供細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑，如抗支原體、細(xì)菌、真菌污染的抗生素以及基因篩選抗生素（Blasticidin, Puromycin, Hygromycin B, G418, Zeocin）。隨著天然免疫研究熱點(diǎn)的興起，InvivoGen于2000年開始致力于天然免疫相關(guān)產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)，并成為全世界優(yōu)質(zhì)、專業(yè)的天然免疫相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)商。InvivoGen為天然免疫研究提供一整套研究方案，包括不斷更新的模式識別受體（PRRs）激動劑和拮抗劑，PRRs報告基因細(xì)胞以及天然免疫信號通路的誘導(dǎo)劑和抑制劑等。