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提高BAC,F(xiàn)osmid文庫拷貝數(shù),您只差了一支誘導劑

作者:admin信息來源:達科為日期:2018年03月26日打印字體:  
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首先安利一下Epicentre的專利技術——CopyControl?克隆系統(tǒng),能夠讓您共享單拷貝和高拷貝的優(yōu)點。CopyControl?克隆:首先以單拷貝形式生長,單拷貝可以確保插入穩(wěn)定及成功克隆編碼基因序列;在需要的時候,通過誘導液誘導成高拷貝克隆,以便下游應用所需。這一系統(tǒng)可以用來構建PCR克隆,對于BAC,F(xiàn)osmid文庫等大型質粒格外有用。

CopyControl?克隆系統(tǒng)有兩個重要成分,相輔相成,缺一不可:

1.CopyControl? pCC1和pCC2載體

pCC1和pCC2載體含有兩個復制起始位點:單拷貝的大腸桿菌F-因子復制子和誘導型的高拷貝oriV。其中OriV的啟動,需要trfA基因產(chǎn)物,由CopyControl?的另一個重要成分——TransforMax? EPI300 E.coli菌株提供。

圖1 pCC1載體圖譜

2.TransforMax? EPI300 E.coli

這是一種工程菌株,含有受誘導啟動子控制的trfA基因,在誘導的條件下可以提供啟動oriV所需要的trfA基因產(chǎn)物。 

圖2 TransforMax? EPI300 E.coli菌株基因型

 

CopyControl?克隆誘導步驟



圖3 CopyControl?克隆流程

 

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